系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人自身抗體的變化及意義
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劉豐海 原江水 宋衛(wèi)青1由 分享
【關(guān)鍵詞】 紅斑狼瘡,系統(tǒng)性；自身抗體；診斷
系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE) 是一種多器官、多系統(tǒng)的復(fù)雜自身免疫性疾病, 以自身抗體的產(chǎn)生和免疫復(fù)合物的聚集為特征。研究表明, SLE病人在嚴(yán)重的免疫功能異常，表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞減少,淋巴細(xì)胞亞群異常,B 細(xì)胞異?；钴S,病人體內(nèi)產(chǎn)生多種自身抗體,如抗核抗體（ANA）、抗雙鏈DNA（dsDNA）抗體和可提取性核抗原（ENA）抗體。本文對(duì)SLE病人血清中的自身抗體進(jìn)行檢測(cè)分析，旨在探討這些自身抗體在SLE發(fā)病和診斷中的作用。
1 臨床資料
1.1 一般資料
收集2007年1～12月在我院診斷為SLE的病人血清262份，診斷均符合1982 年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)。262例中，男35例，女227例；年齡18～75歲，平均（38.3±15.6）歲。另選健康查體者96例作為正常對(duì)照組，男21例，女75例；年齡21～76歲，平均（45.5±14.2）歲。
1.2 檢測(cè)方法
?、賾?yīng)用間接免疫熒光法檢測(cè)病人血清中的ANA，選用人上皮細(xì)胞Hep2和大鼠肝組織切片作為抗原，試劑為德國(guó)歐蒙公司產(chǎn)品。待檢血清行1∶100稀釋，陽(yáng)性者再做1∶1 000和1∶10 000稀釋，稀釋標(biāo)本與抗原在生物薄片反應(yīng)板上共同孵育30 min，洗片，加入FITC標(biāo)記的二抗孵育30 min，洗片，甘油封片，熒光顯微鏡下觀察反應(yīng)結(jié)果。②免疫印跡法檢測(cè)ENA多肽抗體譜：包括抗dsDNA抗體、抗SSA、抗SSB、抗Sm和抗U1?RNP等，試劑均為德國(guó)歐蒙公司產(chǎn)品。將包被了抗原的實(shí)驗(yàn)?zāi)l平放于溫育槽中，加入1.5 mL緩沖液，振蕩孵育5 min，棄液，加入1.5 mL已稀釋的1∶100待檢血清，振蕩孵育30 min，清洗液清洗3次，每次5 min，加入酶標(biāo)記的抗人IgG血清再振蕩孵育30 min，清洗3次后加底物顯色，以試劑公司提供的陽(yáng)性質(zhì)控條帶標(biāo)準(zhǔn)判斷膜條上的陽(yáng)性結(jié)果。
1.3 檢測(cè)結(jié)果
1.3.1 ANA 262例SLE病人ANA滴度1∶100陽(yáng)性者253例（96.5%），1∶1 000陽(yáng)性者153例（58.3%），1∶10 000陽(yáng)性者58例（22.1%），且熒光類型多為核均質(zhì)型和核顆粒型。正常對(duì)照組96例中ANA滴度1∶100陽(yáng)性者8例（8.3%），無(wú)1∶1 000和1∶10 000陽(yáng)性者。SLE病人的ANA陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組，差異具有顯著性（χ2=276.8，P<0.01）。
1.3.2 ENA抗體譜 262例SLE病人抗dsDNA抗體陽(yáng)性者138例（52.7%），抗SSA抗體陽(yáng)性者92例（35.1%），抗SSB抗體陽(yáng)性者54例（20.6%），抗Sm抗體陽(yáng)性者33例（12.5%），抗U1?RNP抗體陽(yáng)性者56例（21.3%）。正常對(duì)照組96例均為陰性。
2 討論
隨著實(shí)驗(yàn)方法的不斷改進(jìn)及醫(yī)學(xué)生物學(xué)的進(jìn)步,對(duì)ANA的理解已不再局限于核成分,而是指抗核酸和核蛋白抗體的總稱,其靶抗原分布不僅存在于細(xì)胞核,還包括細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞的分裂周期等,ANA檢測(cè)是一個(gè)重要的SLE篩選試驗(yàn)。本文中262例病人血清ANA的陽(yáng)性率為96.5%,與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[1]。但ANA出現(xiàn)在多種風(fēng)濕病中,在某些肝病病人血清中也檢測(cè)出ANA,所以ANA在SLE的診斷中僅有篩查價(jià)值。SLE的特征是產(chǎn)生大量致病性ENA,尤其是抗dsDNA抗體具有較高特異性,幾乎僅發(fā)現(xiàn)于SLE病人中。本研究中以免疫印跡法檢測(cè)抗dsDNA抗體的陽(yáng)性率為52.7％。
SLE病人外周血大量凋亡淋巴細(xì)胞可通過(guò)釋放過(guò)量自身抗原的方式誘導(dǎo)一系列自身抗體的產(chǎn)生，從而參與SLE發(fā)生[2]。其中，ENA是在鹽水中可溶解的一系列抗原,在各種自身免疫性疾病中呈現(xiàn)不同的組合。檢測(cè)這些抗體,除有助于SLE的診斷和分型外,還有助于檢測(cè)病人的伴發(fā)疾病?？筪sDNA抗體與SLE活動(dòng)相平行,可作為治療評(píng)估指標(biāo),對(duì)SLE的診斷靈敏度低但特異度高?？筍m抗體是SLE的標(biāo)志性抗體，只表達(dá)于SLE病人中,特異性達(dá)到100%,但陽(yáng)性率只有12.5%?？筍SA抗體和抗SSB抗體主要見(jiàn)于干燥綜合征的病人中,其在SLE病人中陽(yáng)性率也較高,分別達(dá)到35.1%和20.6%,此與SLE病人常并發(fā)干燥綜合征有關(guān)。多個(gè)自身抗體的聯(lián)合檢測(cè), 可提高SLE免疫學(xué)診斷的陽(yáng)性率,彌補(bǔ)某個(gè)指標(biāo)呈陰性時(shí)難以判定的不足。
【參考文獻(xiàn)】
[1]鄒自英,李素華,陳莉. 13種自身抗體檢測(cè)對(duì)SLE的診斷價(jià)值及臨床意義[J]. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志, 2007,23(5):443?446.
[2]初開(kāi)秋,韓俐. SLE病人外周血淋巴細(xì)胞早期凋亡狀態(tài)的檢測(cè)[J]. 齊魯醫(yī)學(xué)雜志, 2003，18（1）：15?17.
系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE) 是一種多器官、多系統(tǒng)的復(fù)雜自身免疫性疾病, 以自身抗體的產(chǎn)生和免疫復(fù)合物的聚集為特征。研究表明, SLE病人在嚴(yán)重的免疫功能異常，表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞減少,淋巴細(xì)胞亞群異常,B 細(xì)胞異?；钴S,病人體內(nèi)產(chǎn)生多種自身抗體,如抗核抗體（ANA）、抗雙鏈DNA（dsDNA）抗體和可提取性核抗原（ENA）抗體。本文對(duì)SLE病人血清中的自身抗體進(jìn)行檢測(cè)分析，旨在探討這些自身抗體在SLE發(fā)病和診斷中的作用。
1 臨床資料
1.1 一般資料
收集2007年1～12月在我院診斷為SLE的病人血清262份，診斷均符合1982 年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)。262例中，男35例，女227例；年齡18～75歲，平均（38.3±15.6）歲。另選健康查體者96例作為正常對(duì)照組，男21例，女75例；年齡21～76歲，平均（45.5±14.2）歲。
1.2 檢測(cè)方法
?、賾?yīng)用間接免疫熒光法檢測(cè)病人血清中的ANA，選用人上皮細(xì)胞Hep2和大鼠肝組織切片作為抗原，試劑為德國(guó)歐蒙公司產(chǎn)品。待檢血清行1∶100稀釋，陽(yáng)性者再做1∶1 000和1∶10 000稀釋，稀釋標(biāo)本與抗原在生物薄片反應(yīng)板上共同孵育30 min，洗片，加入FITC標(biāo)記的二抗孵育30 min，洗片，甘油封片，熒光顯微鏡下觀察反應(yīng)結(jié)果。②免疫印跡法檢測(cè)ENA多肽抗體譜：包括抗dsDNA抗體、抗SSA、抗SSB、抗Sm和抗U1?RNP等，試劑均為德國(guó)歐蒙公司產(chǎn)品。將包被了抗原的實(shí)驗(yàn)?zāi)l平放于溫育槽中，加入1.5 mL緩沖液，振蕩孵育5 min，棄液，加入1.5 mL已稀釋的1∶100待檢血清，振蕩孵育30 min，清洗液清洗3次，每次5 min，加入酶標(biāo)記的抗人IgG血清再振蕩孵育30 min，清洗3次后加底物顯色，以試劑公司提供的陽(yáng)性質(zhì)控條帶標(biāo)準(zhǔn)判斷膜條上的陽(yáng)性結(jié)果。
1.3 檢測(cè)結(jié)果
1.3.1 ANA 262例SLE病人ANA滴度1∶100陽(yáng)性者253例（96.5%），1∶1 000陽(yáng)性者153例（58.3%），1∶10 000陽(yáng)性者58例（22.1%），且熒光類型多為核均質(zhì)型和核顆粒型。正常對(duì)照組96例中ANA滴度1∶100陽(yáng)性者8例（8.3%），無(wú)1∶1 000和1∶10 000陽(yáng)性者。SLE病人的ANA陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組，差異具有顯著性（χ2=276.8，P<0.01）。
1.3.2 ENA抗體譜 262例SLE病人抗dsDNA抗體陽(yáng)性者138例（52.7%），抗SSA抗體陽(yáng)性者92例（35.1%），抗SSB抗體陽(yáng)性者54例（20.6%），抗Sm抗體陽(yáng)性者33例（12.5%），抗U1?RNP抗體陽(yáng)性者56例（21.3%）。正常對(duì)照組96例均為陰性。
2 討論
隨著實(shí)驗(yàn)方法的不斷改進(jìn)及醫(yī)學(xué)生物學(xué)的進(jìn)步,對(duì)ANA的理解已不再局限于核成分,而是指抗核酸和核蛋白抗體的總稱,其靶抗原分布不僅存在于細(xì)胞核,還包括細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞的分裂周期等,ANA檢測(cè)是一個(gè)重要的SLE篩選試驗(yàn)。本文中262例病人血清ANA的陽(yáng)性率為96.5%,與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[1]。但ANA出現(xiàn)在多種風(fēng)濕病中,在某些肝病病人血清中也檢測(cè)出ANA,所以ANA在SLE的診斷中僅有篩查價(jià)值。SLE的特征是產(chǎn)生大量致病性ENA,尤其是抗dsDNA抗體具有較高特異性,幾乎僅發(fā)現(xiàn)于SLE病人中。本研究中以免疫印跡法檢測(cè)抗dsDNA抗體的陽(yáng)性率為52.7％。
SLE病人外周血大量凋亡淋巴細(xì)胞可通過(guò)釋放過(guò)量自身抗原的方式誘導(dǎo)一系列自身抗體的產(chǎn)生，從而參與SLE發(fā)生[2]。其中，ENA是在鹽水中可溶解的一系列抗原,在各種自身免疫性疾病中呈現(xiàn)不同的組合。檢測(cè)這些抗體,除有助于SLE的診斷和分型外,還有助于檢測(cè)病人的伴發(fā)疾病?？筪sDNA抗體與SLE活動(dòng)相平行,可作為治療評(píng)估指標(biāo),對(duì)SLE的診斷靈敏度低但特異度高?？筍m抗體是SLE的標(biāo)志性抗體，只表達(dá)于SLE病人中,特異性達(dá)到100%,但陽(yáng)性率只有12.5%?？筍SA抗體和抗SSB抗體主要見(jiàn)于干燥綜合征的病人中,其在SLE病人中陽(yáng)性率也較高,分別達(dá)到35.1%和20.6%,此與SLE病人常并發(fā)干燥綜合征有關(guān)。多個(gè)自身抗體的聯(lián)合檢測(cè), 可提高SLE免疫學(xué)診斷的陽(yáng)性率,彌補(bǔ)某個(gè)指標(biāo)呈陰性時(shí)難以判定的不足。
【參考文獻(xiàn)】
[1]鄒自英,李素華,陳莉. 13種自身抗體檢測(cè)對(duì)SLE的診斷價(jià)值及臨床意義[J]. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志, 2007,23(5):443?446.
[2]初開(kāi)秋,韓俐. SLE病人外周血淋巴細(xì)胞早期凋亡狀態(tài)的檢測(cè)[J]. 齊魯醫(yī)學(xué)雜志, 2003，18（1）：15?17.