HPLC法測定瀉痢消膠囊中芍藥苷含量分析
摘 要:目的 建立瀉痢消膠囊中芍藥苷的含量測定方法。方法 色譜柱:Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相:甲醇-0.1%磷酸溶液(25:75);檢測波長:230 nm;流速:1.0 mL·min-1。結(jié)果 芍藥苷在0.484 4~2.422 0 μg(r=0.999 9)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,回歸方程分別為Y = 190 9276.923 1X – 4 265.72(r = 0.999 9),平均加樣回收率分別為99.67%(RSD=2.13%)。結(jié)論 所建立的方法準(zhǔn)確可靠,重復(fù)性好,可用于瀉痢消膠囊中芍藥苷的質(zhì)量控制。
關(guān)鍵詞:瀉痢消膠囊;芍藥苷;HPLC
瀉痢消膠囊是由酒黃連、酒白芍、檳榔、澤瀉、甘草等十二味中藥加工制備而成,具有清熱燥濕,行氣止痛之功效[1],在臨床上常用于大腸濕熱所致的腹痛泄瀉,大便不暢,下痢膿血等癥,效果顯著。原標(biāo)準(zhǔn)中只對制劑中的黃連小檗堿成分進(jìn)行了含量測定,而白芍養(yǎng)血斂陰,緩急和里,為方中要藥,目前認(rèn)為芍藥苷為白芍的有效成分,因此,本研究對制劑中的芍藥苷進(jìn)行了含量測定,為完善瀉痢消膠囊質(zhì)量控制提供一定參考。
1 儀器與試藥
1.1 儀器 Agilent1100高效液相色譜儀;UV1100型紫外分光光度計(jì)(上海天美科學(xué)儀器有限公司);KQ-250型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);AB135-S電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司);
1.2 試藥 芍藥苷對照品(110736-200424)均購自中國藥品生物制品檢定所;瀉痢消膠囊(云南白藥集團(tuán)股份有限公司)購自青島國風(fēng)藥店;甲醇、磷酸為色譜純,水為純化水,其他試劑均為分析純。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件 色譜柱:Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相:甲醇-0.1%磷酸(25︰75);檢測波長:230 nm;流速:1.0 mL·min-1。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。
2.2 溶液的配制
2.2.1對照品溶液 取芍藥苷對照品適量,精密稱定,加甲醇溶解并制成每1 mL含120μg的溶液,即得。
2.2.2 供試品溶液 取本品內(nèi)容物,研細(xì),取約0.5 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50 mL,稱定重量,超聲處理(功率300 W,頻率50 kHz)30 分鐘,放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液10 mL,蒸干,殘?jiān)铀?0ml使溶解,用水飽和的正丁醇振搖提取4次,每次20ml,合并正丁醇液,水浴蒸干,殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過、即得。
2.2.3 陰性對照溶液 取白芍以外的其余藥味,制得不含白芍的空白制劑,照供試品溶液的制備方法制備,即得。
2.3 方法學(xué)考察
2.3.1 專屬性試驗(yàn) 精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μL,按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果供試品中芍藥苷色譜峰能達(dá)到基線分離,且保留時(shí)間與相應(yīng)對照品一致;陰性對照溶液在相同保留時(shí)間處無吸收峰,表明其余藥味對芍藥苷的測定無干擾,結(jié)果見圖1。
圖1 芍藥苷對照品(A)、供試品(B)、陰性對照(C)HPLC圖
2.3.2 線性關(guān)系考察 取芍藥苷對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1ml含242.2μg的溶液,精密量取2、4、6、8、10ml,分別置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。以芍藥苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X),對應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)(Y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程為:Y = 190 9276.923 1X – 4 265.72,r = 0.999 9。結(jié)果表明,芍藥苷進(jìn)樣量分別在0.484 4~2.422 0μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.3.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.2.1項(xiàng)下對照品溶液,按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定,重復(fù)測定6次,進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果芍藥苷面積的RSD分別為1.41%(n=6),表明儀器精密度良好。
2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取上述供試品溶液分別于配制后的1、3、5、7、9、12 h測定芍藥苷峰面積,進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD分別為0.96%(n=6)、,表明供試品溶液在12h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。
2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次瀉痢消膠囊(批號20101004)內(nèi)容物,共6份,分別按2.2.2項(xiàng)下方法制得供試品溶液,照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定,進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果制劑中芍藥苷平均含量分別為12.358 3 mg/g,RSD為1.69%(n=6),表明本含量測定方法重現(xiàn)性較理想。
2.3.6 加樣回收試驗(yàn) 取已知含量的瀉痢消膠囊(批號20100401,芍藥苷含量12.358 3 mg/g)內(nèi)容物,共6份,各約0.25g,精密稱定,分別精密加入芍藥苷對照品溶液(0.1205 mg/mL)和甲醇各25 mL,稱定重量,其余按2.2.2項(xiàng)下方法操作,制得供試品溶液,照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定,進(jìn)樣量10 μL,計(jì)算加樣回收率。
2.4 樣品含量測定 取3批樣品按供試品溶液制備法制得供試品溶液,并按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定,每批樣品測定3份。
3 討論
3.1供試品制備方法選擇 本研究對供試品制備方法進(jìn)行了篩選,甲醇液直接超聲處理,進(jìn)樣測定,雜質(zhì)干擾嚴(yán)重,芍藥苷色譜峰分離不理想,進(jìn)而采用正丁醇萃取法進(jìn)行除雜處理[2],結(jié)果供試品溶液中中芍藥苷色譜峰分離良好。
3.2 流動相的優(yōu)選 本研究參考藥典及相關(guān)文獻(xiàn)[3,4]中關(guān)于芍藥苷的含量測定方法,對流動相進(jìn)行了篩選,最終選用甲醇-磷酸(25:75)系統(tǒng),此系統(tǒng)能有效減小芍藥苷拖尾,使色譜峰峰型良好,保留時(shí)間適中。
參考文獻(xiàn):
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HPLC法測定瀉痢消膠囊中芍藥苷含量分析
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