蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，那關(guān)于高一生物蛋白質(zhì)技術(shù)的知識點(diǎn)有哪些呢?下面是學(xué)習(xí)啦小編給大家?guī)淼母咭簧锉匦薜鞍踪|(zhì)技術(shù)知識點(diǎn)，希望對你有幫助。

　　高一生物蛋白質(zhì)技術(shù)知識點(diǎn)

　　1.血紅蛋白的提取和分離

　　倍體積的生理鹽水，緩慢攪拌10min，低速短時(shí)間離心，如此重復(fù)洗滌三次，直至上清液中沒有黃色，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。

　?、谘t蛋白的釋放 在蒸餾水和甲苯作用下，紅細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。

　　注：加入蒸餾水后紅細(xì)胞液體積與原血液體積要相同。加入甲苯的目的是溶解細(xì)胞膜，有利于血紅蛋白的釋放和分離。

　　2.粗分離

　　①分離血紅蛋白溶液

　　將攪拌好的混合溶液離心后，試管中的溶液分為4層。第一層為無色透明的甲苯層，第2層為白色薄層固體，是脂溶性物質(zhì)的沉淀層，第3層是紅色透明液體，這是血紅蛋白的水溶液，第4層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物。將試管中的液體用濾紙過濾，除去之溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。

　?、谕肝?/p>

　　取1mL的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300mL的物質(zhì)的量的濃度為20mmol/L12h換樣品的緩沖液。

　　3.純化 調(diào)節(jié)緩沖液面：打開色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到與凝 ↓ 膠面平齊，關(guān)閉出口。

　　加入蛋白質(zhì)樣品：用吸管將透析后的樣品沿管壁環(huán)繞移動(dòng)加到色譜柱的頂端。加樣后， ∣ 打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，等樣品完全滲入凝膠層后，

　　↓ 關(guān)閉出口。

　　調(diào)節(jié)緩沖液面：加入20mmol/L的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度

　　↓

　　洗脫：連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口，進(jìn)行洗脫。

　　↓

　　收集分裝蛋白質(zhì)：待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集。

　　4.純度鑒定------SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(選做) 三、注意事項(xiàng)

　　電泳技術(shù)

　　電泳技術(shù)就是在電場的作用下，利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而達(dá)到對樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的目的。

　　2. 紅細(xì)胞的洗滌

　　如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。此外，離心速度過高和時(shí)間過長，會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。

　　3.如何檢測凝膠色譜柱的裝填是否成功

　　由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。

　　此外，還可以加入大分子的有色物質(zhì)，觀察色帶移動(dòng)的情況。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時(shí)要重新裝柱。

　　4.為什么凝膠的裝填要緊密、均勻?

　　如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會(huì)在色譜柱內(nèi)形成;5.沸水浴處理加入洗脫液的濕凝膠的目的;不但節(jié)約時(shí)間，還能除去凝膠中可能帶有的微生物和排;6.G-75;“G”代表凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分離范圍，7;7.裝填完后，立即用洗脫液洗脫的目的：使凝膠裝填;8.加入檸檬酸鈉有何目的?為什么要低速、短時(shí)離心;9.與其他真核細(xì)胞相比，紅細(xì)胞的特點(diǎn)及這一特點(diǎn)對;哺乳動(dòng)

　　如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會(huì)在色譜柱內(nèi)形成無效的空隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些空隙中通過，攪亂洗脫液的流動(dòng)次序，影響分離的效果。

　　5.沸水浴處理加入洗脫液的濕凝膠的目的

　　不但節(jié)約時(shí)間，還能除去凝膠中可能帶有的微生物和排除凝膠內(nèi)的空氣。

　　6.G-75

　　“G”代表凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分離范圍，75表示凝膠得水值，即每克凝膠膨脹時(shí)吸水7.5g。

　　7.裝填完后，立即用洗脫液洗脫的目的：使凝膠裝填緊密

　　8.加入檸檬酸鈉有何目的?為什么要低速、短時(shí)離心?為什么要緩慢攪拌? 防止血液凝固;防止白細(xì)胞沉淀;防止紅細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。

　　9.與其他真核細(xì)胞相比，紅細(xì)胞的特點(diǎn)及這一特點(diǎn)對進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離的意義

　　哺乳動(dòng)物及人的成熟的紅細(xì)胞是雙面凹圓餅狀，沒有細(xì)胞核和細(xì)胞器。其含有的血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時(shí)可以通過觀察顏色來判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集脫液。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實(shí)驗(yàn)操作。

　　10.如何檢測血紅蛋白的分離是否成功

　　如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出;如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。